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    如何正确看待 PCR 法定量检测 HBVDNA?
    2019-01-07 信息编号:593077 收藏
HBVDNA 检测是乙型肝炎病毒治疗惟一有效的监测指标,目前国内用于
HBVDNA 定量测定的方法基本上为聚合酶链反应(PCR),并以此标准作为定
量依据。聚合酶链反应是美国科学穆得斯 (Mullis)于 1983 年 发 明 的,并 于
1993年因此获得诺贝尔奖。这个发明大大加快了生命科学研究的步伐,成为
目前研究生命科学的一项不可缺少的技术手段。PCR 技术简单地说,就是能
快速、特异地在体外复制,扩增目的基因(DNA),其扩增的效率就像核裂变的
“链式反应”一样,理论上能将极微量的乃至一个分子的目的基因在较短时间内
681(2~4小时)增加10亿倍。它的原理其实很简单,就是通过将目的 DNA 高温
变性、低温退火、适温延伸三个基本反应步骤构成一个循环,反复进行,每完成
一个循环目的 DNA 即增加1倍,需时2~4小时,在理论上就能将目的 DNA
扩增10亿倍。PCR 技术对基因或特定核酸序列在短时间内的这种极大 的 扩
增效率,已广泛应用于乙型肝炎疾病诊断。
在临床检验中,任何一种临床检验方法,即使对同一份患者的标本,在不同
的测定批次,检测结果也会有一定的差异不可能完全一样。就像打靶一样,同
一个人用同一支枪,枪再准,人的技术再好,也是这次打10环,下次打9环,再
打可能是8环。当然每次差异的多少跟枪和人有很大关系,枪法准确的人每枪
间的环数差异就小;普通人,差异就可能很大。临床检验也是如此。PCR 用于
HBVDNA 定量检测,在使用外部标准进行定量时,由于 HBV DNA 定量数值
较大,通常不同测定批次间的差异也会较通常的检验项目大,其量值变化只要
在一个数量级内,均可视为没有变化。比如一个 HBV DNAPCR 定量检验结
果为每毫升7.2×108拷贝/ml的乙型肝炎患者,在抗病毒药物如拉米夫定或干
扰素治疗2周后,再检测,结果为每毫升5.2×108拷贝,再治疗2周后检测,结
果为每毫升9.0×108拷贝,我们可以认为结果在一个数量级范围内变化,说明
结果没有变化,抗病毒治疗无效果。
PCR 方法动态检测患者血循环中 HBVDNA 的含量还可以判定乙型肝炎
病毒的抗病毒治疗 效 果。患 者 经 抗 病 毒 药 物 治 疗 后,HBV DNA 含 量 持 续 下
降,然后维持在一个较强低水平,说明治疗有效。
另外,PCR 检测乙型肝炎 DNA 可以帮助我们确定症状明显,但酶联法检
测阴性者是否患肝炎。病毒侵入人体后,并不能立刻产生可检测到的特异性抗
原或抗体。从病毒侵入机体到能够检测出特异性抗原或抗体的这段时间,在医
学上被称为“窗口期”。一般来说,乙型肝炎病毒 HBV“窗口期”大致为56天。
而在循环中特异性抗原抗体出现以前,病原体本身应先出现,PCR 技术能够直
接检测到该病原体的核酸DNA。一般用PCR 方法检测病毒核酸可使 HBV 窗
口期从56天缩短至33天。
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