利用抗原和抗体特异性结合的免疫学反应进行诊断,称之为
血清学诊断。 将血清学试验用于疾病的诊断和控制是由Jones在
1913年开创的,最早是将试管凝集试验用于鸡白痢的诊断。 血清
学诊断可以用已知抗体来测定被检材料中的抗原,亦可以用已知
抗原来测定被检动物血清中的特异性抗体。 目前血清学检测极为
广泛地应用于传染病诊断与控制中。
(1)监测疫苗接种方案的效果 疫苗接种是目前传染病控制
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鸡场流行病防控技术问答的重要手段,在传染病的控制中发挥着不可缺少的作用。 但选用
的疫苗是否质量可靠、免疫方式是否正确、免疫程序是否合理,这
些疑问常常困扰着饲养者。 此时,应用血清学检测方法来评估鸡
群免疫后的抗体水平无疑就能提供很大的帮助。
(2)预测接种时间 在临床上,恰当的免疫接种时间是有效免
疫的关键。 有研究表明,首次免疫接种时抗体的阳转率与 ELISA
抗体的阻断率呈明显的负相关,即免疫前抗体水平越高(体现为阻
断率的上升),免疫效果越差。 当母源抗体的阻断率高于70%时,
免疫很难奏效。
(3)确定养殖场存在的问题 目前,由于集约化养殖程度的不
断提高,疾病感染的压力越来越大。 另外,由于混合感染、多重感
染、非典型性病变的不断增多,新病原或新病原型/亚型不断出现,
同时一些古老的疾病也出现新的流行特点,使得流行病学诊断和
临床诊断越来越困难,疾病的确诊往往都是通过实验室的手段来
实现。 另外,疾病一旦发生,诊断所需要的时间往往会与疾病所造
成的损失直接相关,越快做出诊断,就可以越早采取正确的应对措
施,控制或减轻疾病的流行。 血清学检测有助于早期检测到疾病,
且大多具有很好的方便性和快捷性。
另外,许多病原的侵袭,对成年鸡或抗体较高的鸡群仅引起抗
体的变化,在临床上并没有明显的临床症状,但是对雏鸡或者抗体
水平低下、不整齐的鸡群则有发病的危险,通过定期的血清学检
测,就可以做到防患于未然,及早发现问题,及早采取措施,起到一
种预警的作用。
(4)疾病诊断 将血清学方法用于疾病的诊断,目前已建立了
能直接检测抗原或能够区分病毒抗体和免疫抗体的方法。 由于多
数情况下病毒抗体与免疫抗体在滴度或特性上存在差别,所以可
以提示养殖者是否存在病毒感染,如在使用有些抗体检测试剂盒
来检测血清抗体时,研究者发现,将阻断率在70%以上的免疫血
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第二章 鸡病诊断技术清进一步稀释到40倍,大多会呈现阴性结果,而多数人工感染后
血清则仍然呈现阳性结果。
(5)根除方案 血清学检测手段用于疾病的根除,在鸡白痢的
根除计划中应用最多。 对本国的一些流行不太严重或者传播不太
迅速的疾病,如禽白血病等,都可以考虑用剔除阳性个体的根除计
划,利用良好的检测产品进行逐步净化。
38. 血清学诊断的方法有哪些? 如何选择?
鸡场实验室常进行的血清学诊断方法有平板凝集试验、血凝
试验、琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析技术等。
在血清学方法的选择时,应该考虑以下因素,首先应当具有良好敏
感性和特异性,且有重复性和稳定性,并与自己的检测目的相适
应,易于使 用。 此 外 还 要 考 虑 标 准 化/符 合 国 际 标 准 (OIE/USDA)的问题,即是否在国际贸易中得到认可等。
(1)平板凝集试验 细菌、红细胞等颗粒性抗原的悬液与含有
相应抗体的血清或全血混合,在电解质溶液中,抗原颗粒和抗体结
合后,形成肉眼可见的凝集小块,称为凝集反应。 快速全血平板凝
集试验,又称血滴法。 此法操作简单,设备要求不高,而且快速、微
量,主要用于鸡白痢沙门氏菌、鸡慢性呼吸道病、传染性鼻炎的检
疫和净化。
(2)血凝抑制试验 新城疫、禽流感、产蛋下降综合征等病毒
能够与鸡红细胞发生凝集现象,称为病毒的血凝,病毒的血凝可为
相应的特异性抗体所抑制,即红细胞凝集抑制试验(HI)。 血凝抑
制试验可以用于: ①检测血清中的抗体水平,作为适时免疫的辅
助手段,能避免免疫失败、免疫空当及重复免疫造成的损失。 ②鉴
定病毒,辅助诊断病毒性疾病。 血凝试验、血凝抑制试验广泛地应
用于鸡新城疫、禽流感病毒监测和抗体效价检测。
(3)琼脂扩散试验 通常是指双向双扩散试验,试验原理是通
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鸡场流行病防控技术问答过抗原、抗体在琼脂凝胶中由近及远不断自由扩散形成浓度梯度,
在适当比例处相遇形成沉淀线,并由此来检测抗体的效价或鉴定
和区分抗原的一种技术。 琼脂扩散试验在临床中常被用于多种鸡
病诊断和抗体效价检测,如传染性法氏囊病、新城疫、禽流感、传染
性支气管炎、马立克氏病等。 如中国农业科学院哈尔滨兽医研究
所研制的禽流感琼脂扩散(AGP)诊断试剂盒。
(4)酶联免疫吸附试验(ELISA) 是把抗原抗体反应的特异
性,和酶的高效催化作用有机结合起来的一种非放射性标记免疫
检测技术。 近年来,随着单克隆抗体技术和酶标记技术的发展与
应用,市场上已出现了各种各样的商品化 ELISA 试剂盒,广泛应
用于禽病的诊断和防疫中。 ELISA 是禽病商品诊断试剂盒使用
最广泛的方法。 目前国内外建立的 ELISA 反应体系或已市售的
试剂盒用于抗体水平检测的较多,通过检测抗体水平来判断禽群
感染状况或疫苗免疫效果。 李海燕等研制的禽流感间接 ELISA
试剂盒已成功应用于我国多个地区的鸡血清抗体水平检测,鸡传
染性法氏囊病、鸡病毒性关节炎、鸡痘、减蛋综合征等许多家禽传
染病抗体的 ELISA 检测方法均已成熟,并有很多商品化的试剂盒
可应用于临床,这些方法不仅简便快捷,而且结果准确可靠,适合
于开展大规模的免疫抗体监测工作,正逐渐在基层单位普及。
以上四种常用方法各有优缺点:快速全血平板凝集试验简单
易行,但不能定量,特异性有限,适宜基层初检。 血凝、血凝抑制试
验如用于检测禽流感,特异性高,准确性好,可鉴定 HA 亚型,能
直观反映抗体水平,但血清型多时较为繁琐。 琼脂扩散试验虽然
方法简单,但敏感性低。 间接 ELISA 试验敏感性高,特异性强,适
合批量检测,但需要 ELISA 仪,适合有条件的单位开展。 目前某
些血清学免疫学方法已开发出商品化的诊断试剂盒,使用更加方
便。
(5)胶体金免疫层析技术 是20世纪90年代在免疫渗滤技
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第二章 鸡病诊断技术术基础上建立的一种简易、快速免疫检测技术。 由 Beggs等最先
用于人绒毛膜促性腺激素(HCG) 的测定,近年来经过不断完善,
已有大量商品化试剂条得到广泛应用。 它是在单克隆抗体技术、
胶体金免疫层析技术和新材料技术基础上发展起来的。 其原理是
将特异的抗原或抗体以条带状固定于硝酸纤维素膜上的某特定区
域(检测带),胶体金标记另一特异的抗原或抗体,吸附于玻璃纤维
上,然后固定于硝酸纤维素膜的某一特定位置,作为胶体金结合
垫。 当干燥的硝酸纤维素膜一端浸到样品后,由于毛细作用,样品
沿着膜向上移动,当移动至胶体金结合垫(金标垫)处时,如样品中
含有待检物,则发生特异性免疫反应,形成免疫复合物。 继续前移
至检测带时,免疫复合物与固定于检测带上的抗原或抗体发生特
异性结合,而被截留在条带区域上,通过胶体金标记物而得到直观
的显色结果。 而游离标记物则越过检测带,与结合标记物自动分
离。
与其他检测技术比较,应用免疫胶体金快速检测技术时,样品
不需要特殊处理,试剂和样本用量极小,样本量可低至1~2微升;
既可用于抗原检测,也可用于抗体检测,检测时间大大缩短,也不
需荧光显微镜、酶标检测仪等贵重仪器,试验结果可长期保存。 但
该技术一般作为定性,不易定量,大批量地集约性地操作,不如
ELISA 快捷方便。
近年来,免疫胶体金技术以其简便快速、肉眼判读、实验结果
易保存、无需特殊仪器设备和试剂等优点,被广泛应用于许多家禽
传染病的诊断与检测中,特别适宜基层和养殖场使用。 目前该技
术的商品化诊断产品也越来越多,抗原、抗体都可以检测,例如,禽
流感快速诊断试纸条就是利用胶体金免疫层析技术检测禽咽拭
子、泄殖腔拭子、粪便样品中的禽流感病毒。
在对鸡群进行血清学检测时,适当数量的样本可以提供良好
的统计学内在价值,以用于制定种群健康情况处置策略。 合适的
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鸡场流行病防控技术问答样本大小可以通过检查群体内以往抗体滴度获得最佳提示,一般
来说,结果变异越大,样本应该越多,以代表整群状况。