(1) 器皿的严格消毒 所有与鲎试剂接触的玻璃器皿, 都要用
清洁剂处理, 用蒸馏水洗净、 烘干。 然后浸泡在硅烷化试剂中半小
时, 用蒸馏水洗净, 再用注射用水冲洗一次, 经85℃ 干烤半小时
后备用。
(2) 鲎血的抽取 先将鲎体表洗净, 然后用1%碘酒, 70%酒
精消毒胸部与腹部连接的关节处, 用适宜的注射针头 (一般用18G
为宜) 直接从关节处插入至心门, 蓝色的血液即自行流入接收瓶
内。 瓶中选加适量的抗凝剂 (茶碱和咖啡因———注射用品), 加入
浓度为0.02%摩尔/升的3%氯化钠溶液 (一般在80 毫升以下),
用0.05%摩尔/升的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液调至pH7.2左
右, 均必须在无菌无热源条件下制备。 轻微振摇混合, 当流入血量
与瓶中溶液达到1∶1时即可。 为保证试养的鲎能长期存活, 每次
每只鲎只能抽取其血液80~100毫升, 这样每年能抽4~8次血。
(3) 鲎血细胞的分离洗涤 可用下列两种方法处理: ①与抗凝
剂混合的鲎血, 在低温 (10℃ 左右) 下静置48小时, 使鲎变形细
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药用动物养殖技术问答胞自动沉降, 将血浆弃除, 用洗涤液洗3次 (洗涤液配制: 3%氯
化钠溶液, 用氢氧化钠溶液调整pH 值至8, 在无菌无热源条件下
制备)。 根据收集的变形细胞体积, 按1∶3比例加入0.9%氯化钠
注射液, 用无菌操作将变形细胞研磨2小时, 再把细胞液置冰箱中
崩解24小时, 离心分取细胞溶液。 ②把与抗凝剂混合的鲎血, 用
离心机以1000转/分钟的速度离心10分钟, 抽弃上层清液, 加入
30毫升洗涤剂, 使血细胞混悬。 把8瓶混悬液合并成1瓶, 离心
洗涤。 抽弃洗涤液, 剩下鲎的血细胞, 按1∶3体积比例加入无菌
无热源的蒸馏水 (pH7.2), 剧烈振摇。 置冰箱中48小时, 离心分
取细胞溶解物。
(4) 溶解物的制备 取2份体积分析纯的氯仿和1份体积的鲎
血细胞溶解物混合, 冰冻冷却, 时时振摇, 2小时后转移到经除热
源处理的分液漏斗内, 分出细胞溶液。 按其体积每100毫升加入1
摩尔/升氯化钙、 1摩尔/升硫酸镁、 3%氯化钠溶液3~5毫升, 使
含钙和镁量达到0.03~0.05摩尔/升, 分装冷冻干燥, 即为鲎试剂
的成品。