(1) 实验原理 某些病毒表面含有血凝素, 能与鸡红细胞表面
的黏蛋白受体结合, 使红细胞发生凝集, 称为病毒的红细胞凝集现
象, 简称血凝现象。 这种病毒的红细胞凝集现象, 可以被特异性免
疫血清 所 抑 制, 称 病 毒 的 红 细 胞 凝 集 抑 制 现 象, 简 称 血 凝 抑 制
现象。
(2) 临床上的应用
① 辅助诊断病毒性疾病。 当动物感染某种病毒而发病时, 可
在机体的相应器官查出病毒。 利用血凝试验检查被检病料中是否有
能凝集红细胞的病毒存在。 能凝集红细胞的病毒有鸡新城疫病毒、
禽流感病毒、 减蛋综合征病毒等。
② 鉴定病毒。
③ 检测血清中的抗体水平。
④ 作为适时免疫的辅助手段, 避免免疫失败。
(3) 试验材料 (以检测血清抗体水平为例) 96孔 V 形微量反
应板、 振荡器1台、 标准抗原、 1%鸡红细胞悬液、 生理盐水、 被
44 现代鸡病防制实战技术问答检血清、 微量移液器等。
(4) 试验方法和步骤 (以检测血清抗体水平为例)
① 血凝试验。
a. 加稀释液。 用微量移液器向96孔 V 形微量反应板第1~12
孔各加生理盐水50微升。
b. 倍比稀释标准抗原。 用微量移液器吸取标准抗原50微升于
第1孔中, 并反复吹打4~5次, 均匀后吸出50微升至第2孔, 依
次倍比稀释到第11孔, 弃去50微升; 第12孔不加抗原作为对照。
c. 加1%鸡红细胞悬液。 用微量移液器向第1~12孔各加1%
红细胞悬液50微升。
d. 置于振荡器上, 振荡1分钟。 室温下静置15~20分钟后观
察结果。
e. 观察结果。 将反应板倾斜成45°, 沉于孔底的红细胞沿着倾
斜面向下呈线状流动者 (吊线) 为沉淀, 表明红细胞未被或不完全
被病毒凝集; 如果孔底的红细胞铺平孔底, 凝成均匀薄层, 倾斜后
红细胞不流动, 说明红细胞被病毒所凝集。
f. 抗原凝集价的判定: 能使鸡红细胞完全凝集的抗原最大稀
释倍数, 称为抗原凝集价 (也称血凝滴度), 以2的指数表示。 第
12孔对照应不凝集, 在对照成立时才判断结果。
g.4单位抗原的配制: 计算出含4个血凝单位的抗原浓度。 按
下列公式计算:
抗原应稀释的倍数=抗原凝集价/4
例: 若抗原凝集价为 28, 则 4 单位抗原应将原抗原 作 28/4
(即64) 倍稀释。 即取0.1毫升抗原, 加入6.3毫升生理盐水。
② 血凝抑制。
a. 加稀释液。 用微量移液器向96孔 V 形微量反应板第1~12
孔各加生理盐水25微升。
b. 倍比稀释被检血清。 用微量移液器吸取待检血清25微升于
第1孔中, 并反复吹打4~5次, 均匀后吸出25微升至第2孔, 依
次倍比稀释到第11孔, 弃去25微升; 第12孔不加血清作为对照。
c. 加4单位抗原。 向第1~12孔各加25微升4单位抗原。
第一章 鸡病诊断基础与方法 45d. 置于振荡器上, 振荡1分钟, 室温下静置20分钟。
e. 加1%鸡红细胞悬液。 用微量移液器向第1~12孔各加1%
红细胞悬液25微升。
f. 振荡1分钟, 室温下静置20~25分钟后观察结果。
g. 结果判定。 能够使4单位抗原凝集鸡红细胞的作用完全被
抑制的血清最高稀释倍数, 称为该血清的抗体效价, 以2的指数表
示。 第12孔对照应完全凝集, 在对照成立时才判定结果。 如果第
1~8孔均未被凝集, 第9~11孔均凝集, 则血清抗体效价为28。
(5) 注意事项
① 每加一种样品, 都要更换一个移液器的滴头。
② 当红细胞受细菌污染或保存时间过长时, 可出现全部凝集
现象, 试验时一定要注意制备的红细胞悬液保存时间不能过长。
③ 温度对试验结果也有影响。 一般要求在室温25~37℃ 进行
试验, 当温度低于4℃时, 红细胞有时会发生自凝现象。
④ 不同来源、 不同浓度的红细胞会使结果出现差异, 一般需
要3只或3只以上公鸡红细胞混合在一起。 有抗体鸡提供的红细胞
需要更多次数的洗涤。
⑤ 96孔 V 形微量反应板是否洗净、 是否光滑, 也会影响实验
结果。
(6) 实验后用具的处理 用过的反应板、 微量滴头, 先用流水
冲洗, 然后泡在清洁液中, 24小时后捞出, 甩掉清洁液, 放入流
水中冲洗干净后, 再在蒸馏水中冲洗一遍, 甩干, 摆放在恒温箱中
(70℃以下), 烤干备用。
清洁液的配制: 重铬酸钾 79 克, 水 1000 毫升, 硫酸 100 毫
升。 将重铬酸钾磨碎, 溶解于水中, 然后慢慢加入硫酸100毫升,
不断搅拌, 切不可将重铬酸钾水溶液倒入硫酸中, 以防爆炸, 操作
时必须戴手套、 口罩。