矿油也称为液体石蜡, 故也称为液体石蜡保藏法。 该方法是将
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灭菌的液体石蜡注入待保藏的菌种斜面上, 使菌种与外界空气隔
绝。 其作用是隔绝氧气交流、 防止培养基水分蒸发、 降低微生物的
新陈代谢活动、 推迟菌种老化, 达到延长培养物的生命, 从而延长
保存时间的目的。
(1) 矿油灭菌 将液体石蜡装入三角瓶中 (装至瓶体积的三分
之一), 塞好棉塞, 同时准备一套装有虹吸管的与三角瓶配套的橡
皮塞, 用纸包扎好, 一起放置到高压灭菌锅中消毒, 在1.1千克/
厘米2 压力下灭菌30分钟。 然后将装有石蜡的三角瓶置于40℃ 温
箱中, 放置10天左右, 使液体石蜡中的水分蒸发干净, 备用。
(2) 培养菌种 将需要保藏的菌种接入到适宜的斜面培养基
上, 接种后放置到最适宜温度下培养, 待斜面长满健壮菌丝后, 即
可取出注蜡。
(3) 灌注石蜡 在无菌室内, 将无菌带有虹吸管的橡皮塞装到
液体石蜡的三角瓶上, 然后用虹吸管将液体石蜡注入斜面试管内,
以液面高出斜面顶部1厘米为宜。
(4) 封闭棉塞保藏 将灌注好液体石蜡的试管加棉塞, 外包塑
料薄膜或将试管口外多余的棉塞剪去, 用石蜡涂于棉塞顶部及管口
的四周, 然后再用牛皮纸包扎试管。 也可用无菌橡皮塞代替棉塞。
将试管置于冰箱或室内阴凉干燥处保藏。 要定期检查, 发现培养基
露出液面必须及时补加无菌液体石蜡。
(5) 恢复培养 恢复培养时不必倒去石蜡, 用接种工具从斜面
挑取菌丝块, 尽量滴尽附带的石蜡, 移植到新培养基上, 必须经过
两次转接, 才能获得正常生长的菌丝。 液体石蜡易燃, 使用时要注
意防火。 移接时接种工具尽量少带蜡, 避免石蜡在火焰灭菌时爆炸
飞溅。