利用药用真菌的子实体或菌核内部菌肉组织, 在适宜条件下能
生长出菌丝的特性, 来分离获得纯菌种的方法。 此法操作简便, 取
材方便, 在野外采种或室内分离纯菌种时都可采用。 组织分离是一
种无性繁殖, 菌丝细胞是双核细胞, 双核菌丝中的两个核还未进行
核配, 也即双亲染色体并没有发生重组, 所分离获得的菌种是该药
用真菌的营养世代, 容易产生变异, 在适宜营养和培养条件下, 选
择典型的菌落进行培养, 菌株则可保持其原菌种的优良品质, 否
则, 其性状往往会发生变异。
(1) 分离材料的选择与消毒 在野外采集野生菌时, 应根据采
集的目的要求选择优良个体进行分离。 分离人工栽培品种时, 则应
从优良品系中选择优良单株作种菇。 对单菇的要求应该是优良性状
典型、 朵大、 盖厚、 无病虫危害, 最好是用未成熟的菌蕾作分离
材料。
虽然子实体和菌核的任何部位在适合其生长的培养基和培养条
件下都可萌生菌丝, 但不同的药用真菌, 其子实体、 菌核、 菌索不
同部位的组织, 细胞分裂、 生长的旺盛程度不完全一致, 因此, 在
选取优良单株的分离部位时, 也应有所区别。
组织分离时先应将分离材料用清水冲洗干净, 去掉泥沙或污
物, 用纱布擦干水, 即可移到无菌室进行分离前的消毒处理。 一般
较坚硬木质化的子实体或尚未突破菌幕的菌蕾及菌核, 可在0.1%
的升汞液中浸泡1~3分钟, 或用75%的酒精表面擦拭消毒; 而较
柔嫩的子实体, 只能用75%的酒精棉球擦拭表面; 一些胶质菌类
的子实体, 采用无菌水反复冲洗后即可分离。
68总 论
(2) 分离方法
① 子实体组织分离法: 将要分离的子实体放入无菌室内, 用
无菌水冲洗数次, 进行表面消毒, 随即用消毒过的解剖刀从菇柄中
部纵切一刀, 撕开, 挑取菌盖和菇柄交界处的一小块组织, 移接到
PDA 斜面培养基上, 加上棉塞, 在适温下培养, 可见组织块上长
出绒毛状菌丝, 对个体细小的伞菌子实体, 也可采用子实层作组织
分离材; 对胶质菌类的组织分离, 因子实体组织层较薄, 质地较
韧, 菌丝数量极少, 分离难度较大, 一般分离时剖取尚未展开的耳
片胶质团内部的组织块。
② 菌核组织分离法: 有些真菌的子实体不易采集, 而它们的
营养贮藏器官菌核则较易获得, 如猪苓、 茯苓等。 可采用菌核进行
组织分离。
用菌核进行组织分离时, 先将菌核冲洗干净, 用纱布擦干水,
移到接种室内, 用75%酒精进行表面消毒, 用无菌解剖刀把菌核
切开, 在接近菌核外壳附近, 取黄豆粒大小的组织块, 接入 PDA
斜面试管培养基上, 在25℃下培养。
③ 菌索组织分离法: 蜜环菌、 亮菌、 安络小皮伞等一类真菌
可用菌索分离。 分离时, 在无菌条件下, 用75%酒精进行表面消
毒, 可切取幼嫩的白色生长点, 或用无菌解剖刀去掉黑色菌鞘, 用
无菌剪刀剪取一小段白色菌髓, 将其接入试管 PDA 培养基上, 于
25℃下培养, 即可得到该菌的菌种。