1. 试剂
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤、 煌绿乳糖胆盐、 结晶紫中性红
胆盐 琼 脂、 磷 酸 盐 缓 冲 液、 无 菌 生 理 盐 水、 无 菌 盐 酸 溶 液
(1mol/L)、 无菌氢氧化钠溶液 (1mol/L)。
2. 仪器设备
恒温培养箱、 冰箱、 恒温水浴箱、 天平、 均质器、 振荡器、
pH 计、 菌落计数器。
3. 方法
(1) 样品的稀释





 
 105① 固体和半固体样品: 称取25g样品, 放入盛有225mL磷
酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内, 8000~10000r/min均
质1~2min, 或放入盛有225mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无
菌均质袋中, 用拍击式均质器拍打1~2min, 制成1∶10的样品
匀液。
② 液体样品: 以无菌吸管吸取25mL 样品置于盛有225mL
磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶 (瓶内预置适当数量的无
菌玻璃珠) 中, 充分混匀, 制成1∶10的样品匀液。
③ 样品匀液的 pH 值应在 6.5~7.5 之 间, 必 要 时 分 别 用
1mol/LNaOH 或1mol/L HCl调节。
④ 用1mL 无 菌 吸 管 或 微 量 移 液 器 吸 取 1∶10 样 品 匀 液
1mL, 沿管壁缓缓注入9mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试
管中 (注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面), 振摇试管或换
用1支1mL无菌吸管反复吹打, 使其混合均匀, 制成1∶100的
样品匀液。
⑤ 根据对样品污染状况的估计, 按上述操作, 依次制成十
倍递增系列稀释样品匀液。 每递增稀释1次, 换用1支1mL 无
菌吸管或吸头。 从制备样品匀液至样品接种完毕, 全过程不得超
过15min。
(2) 初发酵试验 每个样品, 选择3个适宜的连续稀释度的
样品匀液 (液体样品可以选择原液), 每个稀释度接种3管月桂
基硫酸盐胰蛋白胨 (LST) 肉汤, 每管接种1mL (如接种量超
过1mL, 则用双料LST 肉汤), (36±1)℃培养 (24±2)h, 观察
试管内是否有气泡产生, (24±2)h产气者进行复发酵试验, 如
未产气则继续培养至 (48±2)h, 产气者进行复发酵试验。 未产
气者为大肠菌群阴性。
(3) 复发酵试验 用接种环从产气的 LST 肉汤管中分别取
106 
培养物1环, 移种于煌绿乳糖胆盐肉汤 (BGLB) 管中, (36±
1)℃ 培养 (48±2)h, 观 察 产 气 情 况。 产 气 者, 计 为 大 肠 菌 群
阳性管。
(4) 大肠菌群最可能数 (MPN) 的报告 按复发酵试验确
证的大肠菌群 LST 阳性管数, 检索 MPN 表, 报告每克 (毫升)
样品中大肠菌群的 MPN 值。