1. 试剂
平板计数琼脂培养基、 磷酸盐缓冲液、 无菌生理盐水。
2. 仪器设备
恒温培养箱、 冰箱、 恒温水浴箱、 天平、 均质器、 振荡器、
pH 计、 放大镜。
3. 方法
(1) 样品的稀释
① 固体和半固体样品: 称取25g样品置于盛有225mL磷酸
盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内, 8000~10000r/min均质
1~2min, 或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中, 用拍击式
均质器拍打1~2min, 制成1∶10的样品匀液。
② 液体样品: 以无菌吸管吸取25mL 样品置于盛有225mL
磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶 (瓶内预置适当数量的无
菌玻璃珠) 中, 充分混匀, 制成1∶10的样品匀液。
③ 用1mL 无 菌 吸 管 或 微 量 移 液 器 吸 取 1∶10 样 品 匀 液
1mL, 沿管壁缓慢注于盛有9mL 稀释液的无菌试管中 (注意吸
管或吸头尖端不要触及稀释液面), 振摇试管或换用1支无菌吸
管反复吹打使其混合均匀, 制成1∶100的样品匀液。
④ 按③操作程序, 制备10倍系列稀释样品匀液。 每递增稀
释1次, 换用1次1mL无菌吸管或吸头。
⑤ 根据对样品污染状况的估计, 选择2~3个适宜稀释度的
样品匀液 (液体样品可包括原液), 在进行10倍递增稀释时, 吸
取1mL样品匀液于无菌平皿内, 每个稀释度做两个平皿。 同时,
分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内做空白对照。
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