及时将 15~20mL 冷却至 46℃ 的平板 计 数 琼 脂 培 养 基
[可放置于 (46±1)℃ 恒温水浴箱中保温] 倾注平皿, 并转动平
皿使其混合均匀。
(2) 培养
① 待琼脂凝固后, 将平板翻转, (36±1)℃ 培养 (48±2)h。
水产品 (30±1)℃培养 (72±3)h。
② 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落
时, 可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基 (约4mL),
凝固后翻转平板, 按①条件进行培养。
(3)用肉眼观察, 必要时用放大镜或菌落计数器, 记录稀释倍
数和 相 应 的 菌 落 数 量。 菌 落 计 数 以 菌 落 形 成 单 位 (colonyformingunits, CFU) 表示。
① 选取菌落数在30~300CFU 之间、 无蔓延菌落生长的平
板计数菌落总数。 低于30CFU 的平板记录具体菌落数, 大于
300CFU 的可记录为多不可计。 每个稀释度的菌落数应采用两个
平板的平均数。
② 其中一个平板有较大片状菌落生长时, 则不宜采用, 而
应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数; 若片状菌落
不到平板的一半, 而其余一半中菌落分布又很均匀, 即可计算半
个平板后乘以2, 代表一个平板菌落数。
③ 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时, 则将每
条单链作为一个菌落计数。
4. 结果计算
① 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,
计算两个平板菌落数的平均值, 再将平均值乘以相应稀释倍数,
作为每克 (毫升) 样品中菌落总数结果。
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② 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时
样品中的菌落数(CFU/g或 CFU/mL)= ∑C
(n1+0.1n2)d
式中 ∑C———平板 (含适宜范围菌落数的平板) 菌落数之和;
n1———第一稀释度 (低稀释倍数) 平板个数;
n2———第二稀释度 (高稀释倍数) 平板个数;
d———稀释因子 (第一稀释度)。
③ 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU, 则对稀释
度最高的平板进行计数, 其他平板可记录为多不可计, 结果按平
均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
④ 若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU, 则应按稀释
度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
⑤ 若所有稀释度 (包括液体样品原液) 平板均无菌落生长,
则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
⑥ 若所有稀释度的平板菌落数均不在 30~300CFU 之间,
其中一部分小于30CFU 或大于300CFU 时, 则以最接近30CFU
或300CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。